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上海信帆:如何配制合適的buffer?

更新時(shí)間:2016-11-29      瀏覽次數(shù):2375

      生物系統(tǒng)對(duì)pH的變化非常敏感,PH的變化可能改變或甚至終止正在進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。 因此,配制有效的保持實(shí)驗(yàn)pH穩(wěn)定的緩沖液對(duì)實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要。

  

建立一個(gè)良好的緩沖體系,主要要考慮以下標(biāo)準(zhǔn):

 

  1. pKa

大多數(shù)生物反應(yīng)發(fā)生在PH 6-8之間,因此理想的緩沖液需要具有在該范圍內(nèi)的pKa值,以提供zui大緩沖能力。 大多數(shù)緩沖液在20℃,1個(gè)pKa單位內(nèi)的pH下能地工作。 如果你認(rèn)為你的實(shí)驗(yàn)會(huì)降低反應(yīng)的pH值,那么選擇一個(gè)pKa值略低于工作pH值的緩沖液。 同樣,如果您希望實(shí)驗(yàn)提高您的工作pH,請(qǐng)選擇pKa略高的緩沖液。

 

2. 溶解性

緩沖液應(yīng)非常易溶于水,在非極性溶劑(脂肪,油和有機(jī)溶劑)中極少溶解。 這防止緩沖液積累在細(xì)胞膜,囊泡和其他非極性區(qū)室中。

 

3. 膜不滲透性

緩沖液不應(yīng)該容易地通過細(xì)胞膜 ,這可以減少緩沖液在亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中不成比例的累積。

 

4. zui小鹽效應(yīng)

鹽雖可以調(diào)節(jié)化合物的緩沖能力,但高離子緩沖液可引起生物系統(tǒng)的問題或其它反應(yīng)。 如:在鈣依賴的反應(yīng)中應(yīng)該避免檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖液(Tris也能螯合鈣)。

 

5. 對(duì)解離的影響

緩沖液濃度、溫度和離子強(qiáng)度應(yīng)當(dāng)對(duì)緩沖液的解離具有zui小的影響。

 

6. 離子強(qiáng)度

確保你的緩沖液對(duì)你的實(shí)驗(yàn)環(huán)境的離子濃度沒有太大的影響,正常生理離子強(qiáng)度為:100-200mM的KCl或NaCl。 一些緩沖液,如磷酸鹽,可以顯著影響溶液中離子的濃度。

 

7. 陽離子相互作用

如果緩沖液和陽離子配體形成復(fù)合物,該復(fù)合物應(yīng)是可溶的。 理想情況是,至少一些緩沖化合物不會(huì)形成復(fù)合物。

 

8. 穩(wěn)定性

緩沖液應(yīng)當(dāng)是化學(xué)穩(wěn)定的,抵抗酶促和非酶促降解

 

9. 生化惰性

緩沖液不應(yīng)影響或參與任何生化反應(yīng)。

 

10. 光吸收

緩沖劑不應(yīng)吸收波長(zhǎng)在230nm和700nm之間的可見光或紫外光。 這防止了對(duì)分光光度測(cè)定的干擾。

 

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