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      MMP2/MMP9明膠酶譜法試劑盒細胞樣本應該如何處理

      更新時間:2016-12-26      瀏覽次數:2015

      MMP2/MMP9明膠酶譜法試劑盒細胞樣本應該如何處理:

      細胞樣本用PBS,5倍體積震蕩裂解,估算細胞的體積,然后加入5倍體積的PBS,渦旋振蕩15-30s,而后靜置或低速離心?;蛘呤謩诱鹗?。

      MMP2/MMP9明膠酶譜法試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測MMP-2MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法,其靈敏度可達1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電泳,電泳結束后取出凝膠與酶反應Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區域,從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學反應緩沖液,可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2MMP-9 酶譜及活性,檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進行50次標準小膠檢測,如果小膠加樣孔為10~15個,則總計可檢測500~750個樣品。

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