Bcl-2 Western blot實驗檢測

Bcl-2 Western blot實驗檢測

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B淋巴細胞瘤-2基因簡稱bcl-2（B-cell lymphoma-2）,是細胞凋亡研究中zui受重視的癌基因之一。

Bcl-2基因（即B細胞淋巴瘤/白血病-2基因）是一種癌基因，它具有抑制凋亡的作用，并且近年來的一些研究已開始揭示這一作用的機制。目前已經發現的Bcl-2蛋白家族按功能可分為兩類，一類是像Bcl-2一樣具有抑制凋亡作用，如哺乳動物的Bcl-XL、Bcl-W、Mcl-1、A1、線蟲Ced-9、牛痘病毒E1B119kD等，而另一類具有促進凋亡作用，如Bax、Bcl-Xs、Bax、Bak、Bik/Nbk、Bid和Harakiri。

zui初在血液淋巴細胞中發現Bcl-2能抑制細胞死亡，隨后陸續在其它一些細胞中也發現Bcl-2的這種作用。但近年來研究發現，除這些之外尚存在Bcl-2不敏感的凋亡途徑。

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免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質印跡（Western blotting），是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。結合化學發光檢測，可以同時比較多個樣品同種蛋白的表達量差異。

成功完成Western Blot檢測，必須滿足4個條件：

凝膠洗脫：轉移期間蛋白質必須從凝膠中洗脫出來，如果蛋白質還截留在凝膠中，將無法在膜上進行分析。
吸附到膜上：在轉移過程中蛋白質必須吸附到膜上，如果蛋白不吸附，將無法在膜上進行分析。
處理期間仍截留在膜上：在轉移后的處理過程中蛋白質必須保持吸附在印跡膜上。
處理過程中可接近：被吸附的蛋白質必須能夠與檢測試劑接觸，如果蛋白質被掩蓋則無法檢測。
成功進行WB檢測，則設置合適正確的對照是*的，只要正確設置了這些對照，即可快速和準確的找到WB的問題所在，并保證實驗結果的準確性和特異性！

一般需要設置的對照如下：
陽性對照：明確表達檢測蛋白的組織或細胞，用于檢測抗體的工作效率。
陰性對照：明確不表達檢測蛋白組織或細胞，用于檢測抗體的特異性
二抗對照：不加一抗，用于檢測二抗的特異性
內參對照：檢測標本的質量和二抗系統
空白對照：不加一抗和二抗；用于檢測膜的性質和封閉的效果  

Bcl-2 Western blot實驗檢測