發福利啦!Western blot實驗中不同樣本的不同處理方法大全

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樣品處理及保存

1、懸浮細胞樣品：把細胞及培養液一起收集到15ml或者50ml離心管中，1500rpm離心3min，棄去上清；加入10ml 冷PBS輕輕吹打，1500rpm，4℃離心3min，棄去上清；反復2次；第二次棄去上清后，用1ml 冷PBS重懸細胞，移入1.5ml微型離心管，2500rpm（500g），4℃離心5分鐘，盡量去除所有殘留上清，于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下，一般保存1年，建議盡快檢測。

2、貼壁細胞樣品：
2.1 胰酶消化：用胰酶將細胞消化后，含血清的培養基中和胰酶，吹打，收集到15ml或者50ml離心管中，1500rpm離心3min，棄去上清；加入10ml 冷PBS輕輕吹打，1500rpm，4℃離心3min，棄去上清；反復2次；第二次棄去上清后，用1ml 冷PBS重懸細胞，移入1.5ml微型離心管，2500rpm（500g），4℃離心5分鐘，盡量去除所有殘留上清，于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下，一般保存1年，建議盡快檢測。
2.2 細胞刮子收集細胞：對于某些蛋白（即對胰酶比較敏感或者實驗特殊要求，如E-Cadherin不易用胰酶消化后進行WB檢測），直接用細胞刮子刮下細胞，連同培養基收集到15ml或者50ml離心管中，1500rpm離心3min，棄去上清；加入10ml 冷PBS輕輕吹打，1500rpm，4℃離心3min，棄去上清；反復2次；第二次棄去上清后，用1ml 冷PBS重懸細胞，移入1.5ml微型離心管，2500rpm（500g），4℃離心5分鐘，盡量去除所有殘留上清，于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下，一般保存1年，建議盡快檢測。

3、動物組織樣品：取下合適的動物或者人的組織樣品后用預冷的PBS或者生理鹽水漂洗，盡量除盡殘留血液，用濾紙把多余PBS吸取干凈。把組織分成約50mg大小（依據實驗目的需要進行調整），用錫紙分別包裝好或者用凍存管裝好，于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年，建議盡快檢測。

4、植物樣品：取得待測植物樣品后，用蒸餾水把泥土漂洗干凈，用濾紙把多余水分吸取干凈，分裝成合適大小于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年，建議盡快檢測。

5、細菌樣品：細菌培養完成后，10000rpm離心5min收集細菌，加入PBS吹打，10000rpm離心5min，棄去上清；反復3次，棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。

6、若要檢測磷酸化蛋白，請在3個月內進行。長時間保存樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測不到磷酸化條帶。

7、提取胞漿、胞核蛋白的樣品應盡量采用新鮮樣品，因為凍存會使細胞漿、細胞核破裂。
8、血液樣品（血漿中蛋白）：3000rpm離心20min后收集上清，分裝后于-80度或者液氮凍存待用。3個月以內檢測。

9、運輸時間較長或長距離運送樣品時采用干冰或者液氮。

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