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      DEAE-纖維素DE-32,Cellulose DE-32

      更新時間:2018-12-26      瀏覽次數:2266

      DEAE-纖維素DE-32,Cellulose DE-32

      上海信帆生物供應DEAE-纖維素DE-32,Cellulose DE-32,現貨充足,歡迎咨詢!

      DEAE-纖維素,它采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物,表面又用大分子糖鏈接枝,使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性,保持更高載量,同時又具有更好的分辨率。由于比表面積大,平衡和洗脫的時間也更短。它經過接枝即使是純化病毒,質粒等超大分子的物質,載量基本保持不變。

      DEAE—離子交換劑純化血清IgG使用步驟及注意事項

       DEAE-纖維素(Diethylaminoethyl-cellulose,DEAE)是在纖維素上引入二乙基氨基乙基,屬于弱堿型陰離子交換劑。吸附蛋白質的適pH范圍為7~9,pH超過9.5,DEAE基團則不解離帶電荷。每克DEAE含0.96~1.24mmol/L可解離基團,與蛋白質的交換量可75-122mg/100mgDEAE。

          應用離子交換劑來純化物質,可以是把要純化的物質成分交換吸附于離子交換劑上,然后再分別洗脫下來獲得純品,或者把不需要的成分吸附于離子交換劑上,需要的成分直接流出,得到純品。本實驗采用DEAE-纖維素層析柱純化血清IgG,利用pH6.7的緩沖液溶解樣品IgG,此時IgG粗物中除IgG外,其他雜蛋白均帶上不同數量的負電荷,可以和DEAE上的陰離子發生交換吸附于柱上。IgG因不解離帶電,而不發生交換吸附,利用此特點,讓溶解后的樣品流過DEAE纖維素柱,即可直接收集到較純的IgG。

        (一)試劑及器材

          1.   0.0175mol/L, pH6.7,磷酸鹽緩沖溶液

          2.   奈氏試劑。

          3.   20%(W/V)磺基水楊酸溶液。

          4.   1cm×50cm

          5.   黑、白比色磁盤。

          (二)操作步驟

          1.活化

          根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量,稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,其間換幾次水,每次除去細小顆粒。抽干,改用0.5ml/L NaOH溶液浸泡1h以上,抽干(可用布氏漏斗),用無離子水漂洗,使pH至8左右(用pH試紙檢查)。再改用0.5ml/L HCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用無離子水洗至pH6左右。然后用0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖液,浸泡平衡后使用。

          2.裝柱

          用0.0175mol/L,pH6.7,磷酸鹽緩沖溶液浸泡已處理好的DEAE-纖維素,并更換1~2次。然后攪拌均勻,灌入層析柱中,直至纖維素柱床高約17cm左右為止。柱床形成后,在洗脫瓶裝入0.0175mol/L pH6.7磷酸鹽緩沖溶液,接在層析柱上口,打開柱下端出口,使磷酸鹽緩沖溶液流過纖維素,直至流出液的pH值與磷酸鹽緩沖溶液的pH值*相同(用pH試紙不斷檢查)為止。

          3.上樣 

          上述平衡過程完畢后,關閉柱下口。用滴管吸去纖維素柱面上的深液(但不能低于柱下口),控制流速使樣品慢慢進入纖維素內。待全部樣品進入柱后,在柱床面上加一層0.0175mol/L  pH6.7 磷酸鹽緩沖溶液。

          4.洗脫

          連接洗脫瓶,打開柱下口開始洗脫。控制流速為0.5ml/min, 用試管收集洗脫液,每管10滴。從每滴中取1滴收集液放入在黑色比色盤孔中,加入1滴20%磺基水楊酸檢查是否產生白色沉淀。在此條件下在收集液中首先出現的蛋白質即為純化的IgG。因此,從洗脫開始就應收集洗脫液,直至收集液中無蛋白質出現為止(加磺酰水楊酸不呈白色沉淀),合并含有蛋白質的各管收集液中無蛋白質即為純化的IgG溶液。

          5.再生 

          用過的離子交換劑可以反復使用,使其恢復原狀的方法俗稱“再生”。 由于DEAE-纖維素使用后因帶有大量雜蛋白,所以再生時,先用0.5ml/L NaOH浸洗,用無離子洗至pH8左右,然后用0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖溶液浸泡即可轉型再使用。

          6.鑒定 

          純化后獲得的蛋白質樣品均應進行鑒定后方能證明產品的合格性。

      DEAE-纖維素DE-32,Cellulose DE-32

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