WB實驗中關于抗體選購的幾個注意事項

WB實驗中關于抗體選購的幾個注意事項，上海信帆生物提供Western Blot檢測服務，下面我們就Western Blot幾個常規問題進行解答！

Q：如何選擇各個公司的抗體？
A：抗體可盡量選擇進口原裝抗體，如Abcam，CST，Santa cruz等公司的抗體。根據靶蛋白的種屬（如人，小鼠，大鼠等）以及實驗用途（WB，免疫組化，細胞免疫熒光等）在各個公司的網頁上選擇合適的抗體。選擇抗體時務必注意核對基因NCBI的序列號，以防止因為基因的別名等原因導致買錯抗體。另外再購買抗體時需注意是否提供完善的售后服務，在廠商規定的時間內未能得到預期的實驗結果可將詳細的實驗信息交給抗體公司進行質量投訴，一般提供充分的實驗數據并且在保質期內可以得到抗體調換等售后服務。

Q：抗體使用有哪些注意事項？
A：使用抗體前需仔細閱讀說明書，了解抗體的保存條件以及不同用途下的推薦稀釋比例。較高濃度的抗體（>0.5mg/mL）通常性質更穩定，受生物試劑工藝和成本控制等因素影響，不同品牌的抗體的濃度也不相同，所以購買時應注意比較，經驗不足的實驗者往往被抗體的體積迷惑，要注意相同質量下低濃度的抗體體積反而更大。

Q：為什么各個抗體都要進行 WB預實驗？
A：對WB結果有決定性影響的因素是抗體的效價和如果正確使用手中的抗體。正確使用抗體可以保證抗體效價不被過分的拮抗，與抗原更加有效的結合，從而獲得特異性和非特異性背景之間差異的大化。每一個抗體都有其特性，因此我們必須通過WB預實驗獲得背景小，非特異性條帶少的實驗結果。

預實驗的內容如下：

1）確定一抗的稀釋比例和孵育時間；

2）選擇合適的封閉液及封閉時間；

3）調節合適的上樣量，使內參條帶灰度值趨于一致。

Q：半干轉和濕轉的優缺點有哪些？如何選擇？
A：半干轉和濕轉兩種轉膜方式各有優劣。濕轉適合所有的蛋白尤其分子量大的蛋白，轉膜效率佳，但對試劑消耗量較大，轉膜時間長于半干轉；半干轉適合分子量小于100KD的蛋白，省時、省試劑。

Q：什么是WB的灰度半定量分析？
A：通常用Image J 或photoshop軟件對各個樣本的目的蛋白及其內參蛋白曝光后膠片的灰度值進行計算，按照灰度值的高低來半定量分析各個樣品中蛋白的表達差異。

Q：WB進行幾次重復實驗？
A：我們常規報價的服務內容為進行預實驗（摸索實驗條件）并提供一次正式實驗WB膠片結果。預實驗一般會對封閉條件，抗體濃度，孵育時間等條件進行多次重復以獲得一次優的正式實驗結果。客戶若要求進行2-3次的生物學重復實驗，請在簽訂合同前特別說明，我們會根據工作量的增加收取相應的費用。

WB實驗中關于抗體選購的幾個注意事項