信帆生物銷(xiāo)售組織及血液酸性磷酸酶

信帆生物銷(xiāo)售組織及血液酸性磷酸酶

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測(cè)定意義：                           
ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無(wú)機(jī)磷酸，常見(jiàn)于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。
測(cè)定原理：
在酸性環(huán)境中，ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚，苯酚與4-氨基安替和鐵反應(yīng)生成紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過(guò)測(cè)定510nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算ACP活性。
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1酶標(biāo)板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，變成藍(lán)綠色不能使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，2μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
粗酶液提取：
稱取約0.1g組織，加試劑一1mL充分研磨，4oC、10000rpm離心10min，取上清液待測(cè)。血液可直接用于測(cè)定，如果濃度高的話，用試劑一稀釋。
測(cè)定：
1.酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm。
2. 試劑二置于37 oC水浴中預(yù)熱30 min以上。
3. 空白管：在酶標(biāo)板中加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后37℃保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：在酶標(biāo)板中加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后37℃保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5.對(duì)照管：在酶標(biāo)板中加入40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后37℃保溫15min；加入試劑四120μL，混勻；后加入4μL上清液，混勻后于510 nm測(cè)定吸光度，記為A對(duì)照管。
6. 測(cè)定管：在酶標(biāo)板中加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后37℃保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。

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