酸性轉化酶

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測定意義：

蔗糖轉化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關鍵酶之一。根據適 pH，Ivr分為酸性轉化酶（AI）和中性轉化酶（NI）兩種類型。                          

AI(EC 3.2.1.26)主要存在于細胞液泡或自由空間中，適 pH 為4.5~5.0（酸性），通過降解液泡中蔗糖，調節液泡中蔗糖的利用和果實內糖類的積累。

測定原理：

AI催化蔗糖降解產生還原糖，進一步與3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內510nm光吸收增加速率與AI活性成正比。

自備用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存;

試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存;

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入25mL試劑一充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存;

試劑三：液體30mL×1瓶，4℃保存；

粗酶液提取：

稱取約0.2g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿；12000g，4℃，離心20min，取上清，置冰上待測。

測定步驟和加樣表：

混勻， 37℃準確水浴30min后，煮沸10min左右（蓋緊，以防水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）

混勻，煮沸10min左右（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻， 510nm處記錄各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸餾水稀釋后測定，ΔA=A測定-A對照。

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