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      IMAC(His) 預裝柱的使用方法-上海信帆生物

      更新時間:2020-02-26      瀏覽次數:3628

      IMAC(His) 預裝柱的使用方法-上海信帆生物

      上海信帆生物供應IMAC(His) 預裝柱,產品質量穩定,價格實惠,深受廣大科研用戶青睞!

      建議使用高純度的咪唑,高純度的咪唑在280nm的吸光值較低,甚至不顯示吸光值。緩沖液中咪唑的佳濃度因蛋白的濃度和性質而異。

      如果重組His標簽蛋白是以包涵體的形式表達,建議在各緩沖液或樣品中添加6M鹽酸胍或8M尿素。使用高濃度的尿素或鹽酸胍,有可能引起蛋白變性,變性蛋白可以實現復性。

      當純化柱所需柱壓明顯升高時,則需要清洗,清洗方法如下:

      a. 用至少5~10倍體積的100mM EDTA清洗柱體;

      b. 用10倍體積的1.5M NaCl清洗柱體;

      c. 用10倍體積的蒸餾水清洗柱體;

      d. 用0.2M NaOH處理1~2小時(清除內毒素需12小時);

      e. 用10倍體積的蒸餾水清洗柱體;

      f. 用2倍體積0.1~0.5%的非離子去污劑(溶于0.1M醋酸)處理1-2小時;

      g. 用5倍體積70%的乙醇清洗柱體;

      h. 用10倍體積的蒸餾水清洗柱體。

       

      保存溫度:

       

      用20%的乙醇在中性pH值的條件下沖洗介質和柱子,在4℃~8℃條件下儲存。

       

      應用實例:

       

      哺乳動物細胞表達的HIS標簽蛋白,其細胞分泌上清通過IMAC(His)柱進行富集濃縮,高效地純化回收。

      圖例)

      泳道1:上樣;

      泳道M:Protein Marker;

      泳道3:流出;泳道4:洗脫1;

      泳道5:洗脫2;泳道6:洗脫3。

      產品描述:

       

      螯合的Sepharose,當帶有Ni2+離子時,如果形成氨基酸殘基的復合物,特別是組氨酸殘基被暴露在蛋白質表面時,可以選擇性的結合蛋白質。(His)6融合蛋白可以很容易的結合到親和柱上,然后用含有咪唑的緩沖液進行洗脫。 

       

      產品用途:

       

      His融合蛋白的純化。

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