糞便基因組DNA快速提取試劑盒這么使用更精確

糞便基因組DNA快速提取試劑盒這么使用更精確

上海信帆生物供應(yīng)糞便基因組DNA快速提取試劑盒，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，現(xiàn)貨供應(yīng)！

儲(chǔ)存條件：常溫保存，保質(zhì)期1 年。
產(chǎn)品內(nèi)容：
產(chǎn)品內(nèi)容DE281-50T
裂解液I 25 mL
純化液II 25 mL
結(jié)合液III 40 mL
洗滌液50 mL
洗脫液（TE） 10 mL
硅膠膜DNA 吸附柱50 套
說(shuō)明書(shū)1 份
產(chǎn)品介紹:
糞便基因組DNA 快速提取試劑盒適用于從各種動(dòng)物糞便中快速提取基因組DNA。
提取的DNA OD260/280 一般在1.8 以上，純度高，不含污染和抑制劑，可以直接或者稀釋后用作PCR
擴(kuò)增的模板。
可以同時(shí)提取到腸道上皮細(xì)胞和可能的腸道病原菌的DNA。
注意事項(xiàng)：
1. 裂解液I 容易產(chǎn)生沉淀，，用前需要放置在65℃預(yù)熱使沉淀溶解，用前充分搖勻。
2. 自備試劑：氯仿。
（一）樣品裂解：
1. . 稱(chēng)取0.1-0.3 g 的糞便，加入到含0.5mL 預(yù)熱裂解液I 的1.5mL 的離心管中，震蕩器上劇烈震蕩5-10
分鐘。如果是擴(kuò)量操作，可以使用更多糞便和較大離心管。也可以將同一種糞便在較大離心管中震蕩處
理，然后再分到1.5 mL 離心管中。注意:不論使用大的還是小的離心管，一定要讓管底的糞便震蕩起來(lái)。
2. 將離心管置于65℃水浴中保溫至少10 分鐘。
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3. 12000-15000 g 室溫離心3 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一新離心管中(上清液一般呈淡黃色或深棕色，實(shí)際
顏色隨樣品而異，上清液的體積一般為300-400 μL)。
（二）樣品純化：
1. 在上清液中加入等體積的裂解液II，上下顛倒30 秒充分混勻，溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。
2. 將離心管冰浴至少5 分鐘。
3. 12000-15000 g 室溫離心3 分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新的1.5 mL 離心管中，體積在0.7 mL 左右。
4. 加入0.2 mL 的氯仿(自備)，震蕩器上充分振蕩30 秒混勻。注意:一定要讓管底的溶液震蕩起來(lái)。
5. 12000-15000 g 室溫離心3 分鐘，小心轉(zhuǎn)移上清到新離心管中。
說(shuō)明：離心后兩相交界面將有白色膜狀物，其中有機(jī)相部分顏色較深，一般呈淡棕色。將0.5 mL 上清轉(zhuǎn)
移到新的1.5 mL 離心管中。如果有多余的可以棄之不用。
（三）基因組DNA 收集：
1. 在步驟（二）所得的上清中加入0.8mL 的結(jié)合液III，顛倒數(shù)次混勻后，分多次上同一DNA 吸附柱，每
次上柱后均先室溫放置2 min，然后12,000 rpm 離心1 min，倒掉穿透液。
2. 在吸附柱中加入500 μL 洗滌液，12,000 rpm 離心1 min，棄穿透液。
3. 再將吸附柱12,000 rpm 離心30 s 以甩干乙醇。
4. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的1.5 mL 離心管中。在吸附柱中央加入50 μL 洗脫液（65-70℃預(yù)熱），室溫
靜置5 min。12,000 rpm 離心2 min。將穿透液重新加入吸附柱中央，12,000 rpm 離心1 min 以洗脫更多
基因組DNA。
5. 檢測(cè)DNA 質(zhì)量。將所得的基因組DNA 保存于-20oC 冰箱。

糞便基因組DNA快速提取試劑盒這么使用更精確