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      Western Blot檢測服務(wù)的實驗流程

      更新時間:2023-02-07      瀏覽次數(shù):1074

      Western Blot檢測服務(wù)的實驗流程


      實驗流程:

      蛋白提取-制膠-電泳-轉(zhuǎn)膜-封閉-一抗孵育-二抗孵育-化學(xué)發(fā)光-結(jié)果分析;

      送樣運輸要求:新鮮組織,100mg以上,干冰運輸。細胞量為5*10^6以上,收集細胞沉淀,干冰運輸。



      預(yù)實驗的內(nèi)容如下:

      1)確定一抗的稀釋比例和孵育時間;

      2)選擇合適的封閉液及封閉時間;

      3)調(diào)節(jié)合適的上樣量,使內(nèi)參條帶灰度值趨于一致。


      Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供(提供以下兩種圖片,做之前需要和銷售確認好需要哪種)







      內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張,可提供掃描圖,實驗報告,包括整個試驗流程所涉及的實驗數(shù)據(jù)和實驗步驟。如需進行蛋白純化服務(wù),將提供檢測報告



      服務(wù)內(nèi)容:


      從動物細胞、人或者動物組織、細菌、植物樣品中提取蛋白樣品。


      對蛋白樣品進行半定量分析


      western檢測


      電泳:聚丙烯酰氨凝膠電泳分離蛋白樣品


      轉(zhuǎn)膜:濕轉(zhuǎn)


      抗體孵育:使用抗體檢測膜上的特定蛋白


      Western blot樣本要求


      客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品, 檢測目的蛋白的一抗(或由本公司代購)。樣品要求為:


      1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。


      2、細胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。


      3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。


      注意事項:


      對于細胞和一些微生物樣本,可去除培養(yǎng)基后,加裂解液制備蛋白樣品;若未能及時制備蛋白樣品,去除培養(yǎng)基后,將其液氮速凍后保存于-80℃(約一個月)或保存于液氮(約三個月);運輸時,樣本(含培養(yǎng)基)加冰袋,保持培養(yǎng)基低溫但不結(jié)冰,或者樣本去除培養(yǎng)基后加干冰。


      提取蛋白的樣本最好是新鮮的,同時,以盡可能地提取有效蛋白為準則;樣本需避免反復(fù)凍融。


      所有樣本均不建議保存于-20℃。-20℃時,組織、細胞內(nèi)的水會結(jié)晶,細胞活性和組織微觀結(jié)構(gòu)會受到傷害,生物大分子受到組織、細胞內(nèi)多種因素的影響,穩(wěn)定性可能會明顯降低,但部分純化的大分子可以短中期保存。


       -80℃保存條件時,樣本內(nèi)的生化反應(yīng)減弱,可中期保持組織細胞內(nèi)大分子的穩(wěn)定性,短期保持細胞活性和組織微觀結(jié)構(gòu);


      液氮保存可長期保持組織細胞內(nèi)大分子的穩(wěn)定性、細胞活性和組織微觀結(jié)構(gòu);液氮保存時,盛裝樣本的Ep管管口需用封口膜密封,防止管口爆開造成交叉污染。


      Western Blot檢測服務(wù)的實驗流程



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