丁酰膽堿酯酶(B-CHE)測定試劑盒的操作過程

丁酰膽堿酯酶(B-CHE)測定試劑盒的操作過程

（比色法）

一、測定原理：

丁酰膽堿酯酶水解丁酰膽堿生成膽堿及乙酸，膽堿可以與巰基顯色劑反應生成 TNB 黃色化合物，根據

顏色深淺進行比色定量，水解產物膽堿的數量可以反應膽堿酯酶的活力。

二、試劑組成及配制(50T/24 樣)：

試劑一：標準品，粉劑×3 支，4℃保存。

1μmol/ml 標準品應用液的配制：取標準品一支加生理鹽水 10ml 混勻，現用現配。

試劑二：底物粉劑×2 支，用時每支粉劑加生理鹽水 20ml，現用現配，配好后 4℃保存兩周。

試劑三：顯色劑貯備液，3ml×1 支，4℃保存，用時以生理鹽水 1︰9 稀釋，配成顯色應

用液。需多少配多少，也可以一次配成 30ml，避光冷藏。保存期 3 個月。

試劑四：抑制劑，液體×1 支。打開后可以裝在空的小塑料瓶內（附空瓶一只），室溫保存。

試劑五：透明劑，液體 6ml×1 支。室溫保存。

生理鹽水：60ml×2 瓶，室溫保存。

三、操作過程：

1、樣本前處理：

組織樣本:準確稱取組織重量,按重量(g)：體積(ml)=1：9 的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下

機械勻漿，2500 轉/分，離心 10 分鐘，取上清，即為 10%勻漿上清液;

血清樣本：取抗凝全血 1000～1500 轉/分鐘，離心 10 分鐘，取上層血漿。也可測血清，測時將血清(漿)

用生理鹽水 1︰19 稀釋；

全血樣本：取 0.1ml 抗凝全血加生理鹽水至 10ml 按 1︰99 稀釋，取 a ml(一般取 0.1ml)檢測，每個樣本

取樣前必須充分混勻。

3、參考取樣量：

①、大鼠血清測試前用生理鹽水 20 倍稀釋，參考取樣量為 30～50μl。

②、10%腦組織勻漿的參考取樣量為 30～50μl。

③、1︰99 稀釋后的全血稀釋液取 0.1ml。

五、本法優點：

1、靈敏度高。微量樣品即可測出丁酰膽堿酯酶的水平。

2、可以分型。另有配套試劑盒可測乙酰膽堿酯酶。

3、方法簡便快速，準確穩定。

4、不需氣相色譜等高級儀器，只要一般分光光度計即可。

丁酰膽堿酯酶(B-CHE)測定試劑盒的操作過程