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      豬α干擾素(IFN-α)ELISA檢測原理

      更新時間:2024-07-03      瀏覽次數:611

      豬α干擾素(IFN-α)ELISA檢測原理

      背景介紹:

      α干擾素是機體免疫細胞產生的一種細胞因子,是機體受到病毒感染時,免疫細胞通過抗病毒應答反應而產生的一組結構類似、功能接近的低分子糖蛋白。干擾素在機體的免疫系統中起著非常重要的作用,它有很多亞型,其中最大的一類亞型是α-干擾素。各種配方的IFN-α已被開發為治療幾種形式的癌癥和病毒感染的藥物,但其主要用途是治療慢性丙型肝炎。

       

      產品名稱:豬α干擾素(IFN-α)ELISA檢測試劑盒

      英文名稱:Porcine IFN-α ELISA Kit Instruction

      貨號:XFP40219

      規格:48T/96T

      儲存條件:2-8

      有效期:6個月

       

      檢測原理:

      試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被豬α干擾素(IFN-α)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬α干擾素(IFN-α)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

       

      樣品收集、處理及保存方法

      以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

      1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

      2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-81000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

      3.  細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

      4.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mLPBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

      注:標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

      5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

       

      操作注意:

      1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。所有液體組分使用前充分搖勻。

      2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

      3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

      4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。

      5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

      6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

      7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

      8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

      9. 不能使用過期產品。

      10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置


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