ELISA的由來（酶聯(lián)免疫的由來）

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （又稱酵素免疫分析法 ，Enzyme-linked immunosorbent assay，簡稱ELISA ）利用抗原 抗體之間專一性鍵結(jié)之特性，對檢體進(jìn)行檢測；由於結(jié)合於固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性 ，因此設(shè)計(jì)其鍵結(jié)機(jī)制後，配合酵素呈色反應(yīng)，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，並可利用呈色之深淺進(jìn)行定量分析。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （又稱酵素免疫分析法 ，Enzyme-linked immunosorbent assay，簡稱ELISA ）利用抗原 抗體之間專一性鍵結(jié)之特性，對檢體進(jìn)行檢測；由于結(jié)合于固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性 ，因此設(shè)計(jì)其鍵結(jié)機(jī)制后，配合酵素呈色反應(yīng)，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用呈色之深淺進(jìn)行定量分析。 根據(jù)待測樣品與鍵結(jié)機(jī)制的不同，ELISA可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方式，主要以三明治法（ sandwich ）、間接法（ indirect ）、以及競爭法（ Competitive ）三種為主，以下為各種方法之介紹。根據(jù)待測樣品與鍵結(jié)機(jī)制的不同，ELISA可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方式，主要以三明治法（ sandwich ）、間接法（ indirect ）、以及競爭法（ Competitive ）三種為主，以下為各種方法之介紹。

三明治法

三明治法常用於檢測大分子抗原，一般之操作步驟為:三明治法常用于檢測大分子抗原，一般之操作步驟為:

1. 將具有專一性之抗體固著（ coating ）於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體將具有專一性之抗體固著（ coating ）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體
2. 加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
3. 洗去多餘待測檢體，加入另一種對抗原專一之一次抗體，與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié)洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一之一次抗體，與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié)
4. 洗去多餘未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)
5. 洗去多餘未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

三明治法分別以兩種抗體對檢體中的抗原進(jìn)行兩次專一性辨認(rèn)，因此專一性相當(dāng)高，但此待測抗原必須是多價(jià)抗原，如此才可獲得兩種以上的專一性抗體，以分別進(jìn)行夾心；而且此法需要足夠的表位空間以進(jìn)行抗原抗體的夾心，所以並不適用於半抗原或小分子抗原等分子量較小之標(biāo)的。三明治法分別以兩種抗體對檢體中的抗原進(jìn)行兩次專一性辨認(rèn)，因此專一性相當(dāng)高，但此待測抗原必須是多價(jià)抗原，如此才可獲得兩種以上的專一性抗體，以分別進(jìn)行夾心；而且此法需要足夠的表位空間以進(jìn)行抗原抗體的夾心，所以并不適用于半抗原或小分子抗原等分子量較小之標(biāo)的。

間接法

間接法常用於檢測抗體，一般之操作步驟為：間接法常用于檢測抗體，一般之操作步驟為：

1. 將已知之抗原固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘之抗原將已知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余之抗原
2. 加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)
3. 洗去多餘待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結(jié)洗去多余待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結(jié)
4. 洗去多餘未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗原的含量。洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，借儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗原的含量。

競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制，一般用於檢測小分子抗原，其操作步驟為：競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

1. 將具有專一性之抗體固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體
2. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
3. 加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)，由於塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來。加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來。
4. 洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著於孔盤上時(shí)，一般會(huì)考慮使用競爭法ELISA。當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí)，一般會(huì)考慮使用競爭法ELISA。