新城疫間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的研究介紹

       利用新城疫弱毒Clone30株病毒抗原．通過(guò)間接ELISA方法對(duì)試劑盒的各項(xiàng)反應(yīng)條件進(jìn)行系列的摸索試驗(yàn)后，成功地組裝了檢測(cè)試劑盒。 對(duì)ELISA各項(xiàng)反應(yīng)條件進(jìn)行摸索，并確定了zui適工作條件，研究結(jié)果表明，新城疫病毒抗原*包被濃度為1.086ug／ml，zui適包被條件為4℃過(guò)夜，被檢血清*稀釋度為1∶100，酶標(biāo)結(jié)合物*工作濃度1∶800。待檢血清和酶標(biāo)二抗的反應(yīng)時(shí)間均為37℃ 30分鐘，底物的反應(yīng)時(shí)間為37℃ 15分鐘。采用已確立的ELISA反應(yīng)條件，檢測(cè)14份經(jīng)西班牙海博萊公司的NDV-ELISA試劑盒檢測(cè)為陰性的血清，依據(jù)陰陽(yáng)性臨界值=陰性血清OD平均值+3SD，確定陰陽(yáng)性臨界值為0.34。用Lasota株全病毒進(jìn)行阻斷試驗(yàn)結(jié)果表明，Lasota株病毒能夠阻斷陽(yáng)性血清與包被的Clone30株病毒的結(jié)合反應(yīng)。用此方法檢測(cè)E.coli的O_1、O_2、O_（78），AI H_9，EDS_（76），IBD的單因子雞血清，均為陰性，無(wú)交叉反應(yīng)，說(shuō)明建立的ELISA具有很好的特異性。用已建立的ELISA和西班牙海博萊公司的NDV-ELISA試劑盒同時(shí)對(duì)64份血清樣本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表明，建立的ELISA方法的特異性和敏感性分別為90％和93.2％。同時(shí)，用已建立的ELISA方法與HI方法對(duì)80份血清樣本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明ELISA的效價(jià)對(duì)數(shù)與HI效價(jià)對(duì)數(shù)呈線性回歸關(guān)系，二者的相關(guān)系數(shù)（r）為0.91。試劑盒的保存期試驗(yàn)結(jié)果表明，試劑盒可以保存到三個(gè)月。 本研究建立了一種經(jīng)濟(jì)、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，為我國(guó)進(jìn)行ND的血清學(xué)檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查提供了良好的技術(shù)手段，為該試劑盒的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和商品化奠定了較好的基礎(chǔ)。