間接 競爭 ELISA試劑盒 檢測TGEV方法的建立

      研究用經Ni2+-NTA金屬螯合層析柱純化后獲得純化的重組N蛋白作為抗原檢測試劑,抗重組N蛋白的單克隆抗體作為抗體診斷試劑,用非離子去污劑暴露出TGEV的核衣殼蛋白,利用競爭原理針對糞便中的TGEV建立了一種快速的間接競爭ELISA檢測方法。并對方法中封閉液的選擇及工作條件進行了確定,結果表明0.5%聚乙烯醇在37℃封閉2h效果。該方法對感染TGEV的20頭份仔豬的糞便樣品進行檢測,并用統計學方法對仔豬糞便樣品的檢測數據進行了分析,確定了陽性值判定標準為:在陰性對照（N）OD492nm>0.9情況下,抑制率大于14.5%為陽性。特異性實驗結果表明,建立的間接競爭ELISA對豬輪狀病毒、豬流行性腹瀉病毒等腸道病毒的檢測均為陰性反應。 以TGEV TH-98株的強毒株人工服感染未進初乳的初生仔豬,24h后收集仔豬糞便樣品,用間接競爭ELISA和RT-PCR方法分別對糞便進行病原體檢測,結果表明,在仔豬感染62h以后,用間接競爭ELISA方法可檢測到在腸道內擴增的TGEV;RT-PCR方法在感染后57h即可檢測到TGEV。RT-PCR方法比間接競爭ELISA要早近5h檢測到TGEV。對63h以后的糞便作10倍稀釋時,間接競爭ELISA方法可檢測到糞便中的TGEV,而RT-PCR方法對糞便作20倍、40倍稀釋時,仍可檢出TGEV。表明RT-PCR方法較間接競爭ELISA方法敏感。