ELISA方法 捕獲HCMV pp65特異性IgM抗體檢測病毒活動性感染

  建立ELISA抗體捕獲法用于檢測HCMVpp65特異性IgM，以確定感染狀態(tài)，為HCMV活動性感染診斷試劑盒的研發(fā)提供理論和實驗依據(jù)。方法：將HCMVAD169株感染HF細(xì)胞，粗提HCMV抗原；通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）和Western-blotting篩選出HCMVpp65抗原，測定pp65抗原效價及其和特異性抗體的親和力：用辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記HCMVpp65單克隆抗體（McAb）。通過抗人μ鏈包被微量滴定板，先后加待檢血清和pp65抗原-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，建立ELISA捕獲HCMVpp65特異性IgM抗體方法學(xué)。用該法檢測30份兒童、30份孕婦和28份免疫缺陷者的研究血清樣本，并用DIESSE公司酶免疫HCMV IgM檢測試劑盒同步檢測。結(jié)果：制備的HCMV-pp65抗原PAGE膠上位于65KD Marker處，呈單一條帶，抗原效價為1：100；HRP-MCAb免疫雙擴(kuò)效價為1：32；檢測系統(tǒng)各反應(yīng)物的*稀釋度為抗人μ鏈0． 75μg／孔，待檢血清為1：100，HCMV抗原為1：100，HRP-McAb 1：20：兩種方法的各組陽性率分別為6． 7％、13． 3％、10． 7％和10％、13． 3％、14． 3％，總符合率為91％。結(jié)論：建立了簡便、快捷、特異性和敏感性均較高的ELISA捕獲HCMV pp65特異性IgM抗體法，其檢測結(jié)果與DIESSE公司酶免疫HCMV IgM檢測試劑盒的總符合率為91％?？捎糜趦赫?、孕婦和免疫力低下者，診斷HCMV活動性感染。