ELISA試劑盒科研成果--胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定

    胸膜肺炎放線桿菌是引起豬傳染性胸膜肺炎的病原，給養豬業帶來嚴重的經濟損失。目前共有15個血清型，該病原菌的主要毒力因子包括CPS、LPS、OMP、TBP、粘附因子、內毒素、尿素酶等。Apx毒素是APPzui主要的毒力因子，現證明不同血清型的菌株可產生4種Apx，ApxⅡ除血清型10和14以外，其它血清型都分泌；任何血清型都能在體內分泌毒素蛋白ApxⅣ，但體外培養的細菌卻不能分泌該毒素。

    本研究包括如下三方面的內容：

    1．胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定 將病料接種培養基，經過24小時的培養后將細菌進行純化，挑單菌落革蘭氏染色、鏡檢，將細菌接種到細菌鑒定微量反應管，同時以細菌制備模板，做apxⅣ-PCR，然后經過瓊脂擴散試驗確定血清型。結果從患病豬的肺、關節分離到胸膜肺炎放線桿菌6株，其中，4株4型，1株3型，1株未定型。

    2．胸膜肺炎放線桿菌ApxⅡ-ELISA抗體檢測試劑盒的研制及其應用 根據ApxⅡ的特點，實驗室已經建立了一種能夠監測疫苗免疫后的抗體水平和對疫苗免疫效果進行評估的血清學方法ApxⅡ-ELISA；本研究將該診斷方法進一步研制成試劑盒，對其特異性、敏感性、重復性和穩定性進行了測試，與間接血凝試驗試劑盒進行了對比研究，并用該試劑盒檢測了來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的研究豬血清1453份，同時也制作了ApxⅡ的抗體削長規律曲線 結果表明ApxⅡ-ELISA試劑盒具有很高的特異性和敏感性；三批試劑盒的批內和批間的重復性良好（變異系數均＜15％）；試劑盒在2～8℃保存9個月內穩定性良好；檢測來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的研究豬血清的陽性率分別為49.56％、85.51％、1.92％、73.33％、1.85％和100％。從ApxⅡ抗體消長規律的曲線可以看出，疫苗免疫后3周或者4周就可以監測到ApxⅡ抗體，抗體水平達到峰值時，其值為1∶1280。ApxⅡ-ELISA試劑盒能夠有效的診斷豬傳染性胸膜肺炎，同時也可作為一種評價豬群免疫后免疫效果的有效方法；            

3．胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣ-ELISA抗體檢測試劑盒的研制及其應用 根據ApxⅣ的特點，實驗室已經建立了一種能夠特異性的診斷豬傳染性胸膜肺炎，并且能夠有效的區分感染豬與免疫豬的鑒別診斷方法ApxⅣ-ELISA。本研究將該診斷方法進一步研制成試劑盒，對其特異性、敏感性、重復性和穩定性進行了測試，與間接血凝試驗及IDEXX公司的CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒進行了對比研究，并用該試劑盒檢測了來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的研究豬血清1453份，同時也制作了ApxⅣ的抗體削長規律曲線。 結果表明ApxⅣ-ELISA試劑盒具有很高的特異性和敏感性，與CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒的檢測符合率為91.37％；三批試劑盒的批內和批間的重復性良好（變異系數均＜15％）；試劑盒在2～8℃保存9個月內穩定性良好；App感染后3周或者4周就可以監測到ApxⅣ抗體，抗體水平達到峰值時，其值為1∶640。檢測來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的研究豬血清的陽性率分別為22.30％、39.72％、0.64％、42.22％、1.85％和93.94％。ApxⅣ-ELISA試劑盒能夠有效區分APP感染豬與三價滅活疫苗或亞單位疫苗免疫豬。

   目前，胸膜肺炎放線桿菌比較難以分離，其原因有待進一步研究。本研究分離出6株APP地方分離株，對我國豬傳染性胸膜肺炎的病原學與流行病學研究積累了一定的菌株資源。同時，對ApxⅡ-ELISA和ApxⅣ-ELISA兩種抗體檢測試劑盒進行了產業化研究，其中ApxⅣ-ELISA達到研究應用水平，對豬傳染性胸膜肺炎的診斷與防控具有十分重要的意義。（轉自 論文網）