人血管生成素4（ANG-4）ELISA試劑盒 實驗指南

人血管生成素4(ANG-4)ELISA試劑盒 是一種利用雙抗體夾心法測定標本中大鼠白介素6含量的科研試劑盒。上海百蕊生物科技有限公司專業銷售 elisa檢測試劑盒，質量可靠，價格低廉。我們所銷售的大鼠白介素6Elisa試劑盒，具有度高于市場同類產品，性價比在市場上具有很強的優勢，如果產品有質量問題，免費包退換。歡迎廣大師生朋友訂購， ： 或者 14721017287，:

 用于ELISA測定的研究標本zui為常用的是血清（漿）其次為唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。血清標本測定的標志物為傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、特種蛋白時，在處理和保存方面要考慮以下幾個方面：1）要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，故在以HRP為標記酶的ELISA 測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色［1］。2）樣本的采集及血清分離中要注意避免細菌污染。細菌生長分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用；此外一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。3）血清標本如是以無菌操作分離，則可在2～8℃下保存1周。如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存應在- 70℃以下。4）冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。5）標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集，要注意收集時間對測定結果產生影響。

實驗時通常將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。因此在ELISA測定中試劑準備zui關鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定。以使試劑盒在使用前與室溫平衡。其目的是在后面的溫育反應步驟中，使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。此外，當試劑盒以OPD為底物時，則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。

    在現在的ELISA商品試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意避免以下幾點：加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產生污染。出現氣泡則反應液界面有差異。試劑的加入除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要。滴加太快易出現重復滴加或加在兩孔之間的現象，這樣就會在孔內的非包被區出現非特異吸附，從而引起非特異顯色。故有時一份標本用相同的試劑盒兩次測定結果不同，往往是上述加樣及試劑的錯誤所致。

       溫育是ELISA測定中zui容易出現問題的步驟。ELISA作為一種固相免疫測定，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間，且溫育所需時間與溫度成負相關性。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。 目前ELISA商品試劑盒，國產反應溫育時間為37℃ 30分鐘～1小時，進口試劑盒為37℃ 1～2小時才能較*的結合。溫育實際測定操作中要注意以下幾點：1）要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間。在研究實驗室中，通有將微孔板一放入溫箱即開始計時，造成實際測定中溫育時間不夠，弱陽性樣本測不出來 。南方冬季室內溫度較低應特別注意，此時微孔板轉入溫箱后37℃溫育時間不夠，以致弱陽性樣本測定為陰性［3］。為保證37℃下足夠的溫育時間，可自行確定本實驗室不同季節（不同室溫下）微孔板從室溫拿至溫箱所需時間孔內溫度才能達到37℃，用一小溫度計放置板孔反應溶液中測量觀察即可。2）溫育溫度的選擇。在有的ELISA試劑盒的說明書中，指出溫育溫度可有兩種。從免疫測定的抗原抗體反應的本質來看，在較低的溫度下反應較長的時間zui為*。建議在研究ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應時間的條件。3）“邊緣效應”的排除。“邊緣效應”指外周孔顯色較中心孔深，原因為96孔板周孔與中心孔表面熱力學梯度不同。使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可排除“邊緣效應”，且可提高測定重復性。
    總而言之，盡量采用水浴，溫育中讓微孔板浮于水面上，或將浸透水的沙布放入一大飯盒中成一濕盒，放于溫箱中。這樣因板條孔底部直接與37℃水或濕布的接觸，水浴箱或濕盒內的高溫度使反應溶液的溫度迅速與溫室平衡。