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      產(chǎn)品展示/ Product display

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      李斯特氏菌檢測試劑盒

      本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血
      清和尿樣中李斯特氏菌殘留的定量檢測。

      • 產(chǎn)品型號:
      • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
      • 更新時間:2024-10-07
      • 訪  問  量:1862
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      詳細介紹

      所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等

       1

      李斯特氏菌酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

      本試劑盒僅供研究使用。

      1 使用目的:

      本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血

      清和尿樣中李斯特氏菌殘留的定量檢測。

      2 實驗原理

      本試劑盒采用競爭ELISA 方法,在微孔板包被有李斯特氏菌偶聯(lián)抗原,加入李斯特氏

      菌標準品或樣品,游離李斯特氏菌與微孔條上預包被的李斯特氏菌偶聯(lián)抗原互相競爭抗李斯

      特氏菌抗體酶標記物,用TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色,用酶標儀在

      450nm 波長下進行檢測,吸光值與樣品中李斯特氏菌含量成反比,通過標準曲線計算樣品中

      李斯特氏菌的含量。

      李斯特氏菌酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒3 試劑盒組成

      3.1 預包被的李斯特氏菌偶聯(lián)抗原的可拆酶標板:1 塊(12 孔×8 條)。

      3.2 李斯特氏菌標準品:6 瓶(1ml/瓶),含量分別是: 0 ppb,0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1

      ppb。

      3.3 抗李斯特氏菌抗體酶結合物:1 瓶(6ml)。

      3.4 顯色液A:1 瓶(6ml)。

      3.5 顯色液B:1 瓶(6ml)。

      3.6 終止液:1 瓶(6ml),2M 硫酸。

      3.7 樣本稀釋液:1 瓶(10×, 6ml),用于樣品稀釋用。

      3.8 濃縮洗滌液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。

      3.9 說明書一份。

      4 需要而未提供的材料

      4.1 設備

      4.1.1波長450nm酶標儀。

      4.1.2粉碎機。

      4.1.3量筒。

      4.1.4振蕩器。

      4.1.5漏斗。

      4.1.6Whatman 或相當?shù)臑V紙。

      4.1.7微量移液器。

      4.2 試劑

      4.2.1去離子水或蒸餾水。

      4.2.2 甲醇。

      李斯特氏菌酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒5 貯存

      5.1 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍

      5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存

      6 注意事項

      6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。

      2

      6.2 不要使用過期試劑盒。

      6.3 試劑盒使用前,將試劑恢復至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。

      6.4 標準品中含有李斯特氏菌,使用時應特別注意,操作時應帶手套。

      6.5 終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。

      6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結果。

      6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標準品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響

      實驗結果。

      6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結果

      6.9 混合試劑時應避免起泡。

      李斯特氏菌酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒7 工作液準備

      7.1 李斯特氏菌標準品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb

      7.2 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用

      7.3 樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用

      7.3 顯色劑:已備用,避免光線直照

      7.4 反應終止液:已備用

      8 樣品處理程序(樣品在提取過程中,要嚴格按說明書操作,提取過程中應準確稀釋,否則

      會出現(xiàn)結果不準確,樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存)

      8.1取10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液

      8.2強力振蕩3分鐘

      8.3用Whatman 濾紙過濾

      8.4取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)

      9 酶免分析步驟

      9.1 實驗須知

      9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫(25±2℃),時間約2小時。回溫至室

      溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存

      注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準確度。

      9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存

      9.1.3 請不要改變分析程序

      9.1.4 請使用精確的微量移液器

      9.1.5 操作一旦開始,請不要中斷任何程序

      9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序,請嚴格按照要求操作

      9.1.7 為避免交叉污染,每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣

      9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面

      9.2 分析步驟

      9.2.1 預*行編號,標記B0、標準品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測

      9.2.2 取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

      9.2.3 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)

      9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標準品溶液

      9.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液

      9.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液

      9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗李斯特氏菌抗體酶結合物

      9.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。

      9.3 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應板,可以減少雙孔誤差)

      9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液

      3

      體。

      李斯特氏菌酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒9.4 反應

      9.4.1 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A,再加 50μl顯

      色液B;輕微晃動反應板使之*混勻

      9.4.2 37℃溫浴10min

      9.4.3 每孔中加入50μl終止液,混勻

      9.4.4 在450nm下檢測吸光度,結果在5min內(nèi)讀取。

      10 結果計算

      10.1定量分析

      10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個標準(0標準)

      的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

      B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

      B0—0μg/L標準溶液的平均吸光度值

      10.1.2以李斯特氏菌濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖。根據(jù)樣品

      百分吸光度值,可從曲線上得到對應點的橫坐標,即為李斯特氏菌濃度的對數(shù)值,求得反對

      數(shù)即為測定液中李斯特氏菌濃度C(ppb)

      10.1.3由于樣品經(jīng)過了預先稀釋,因此根據(jù)標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋

      倍數(shù)。

      10.2 半定量測定

      10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行,根據(jù)樣品與標準品吸光

      度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。

      10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行,根據(jù)樣品與標準品顏色

      深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。

      11 特異性

      物質(zhì) 交叉反應

      李斯特氏菌 100%

      12 試劑盒參數(shù)

      本試劑盒檢測下限為0.05ppb

      B0吸光度*值應大于1.0

      試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。

      用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。

      13

      試劑盒提供的標準曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。

      14 分析限制

      本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。

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