改良吉姆薩染色

服務(wù)介紹：

組織切片及細(xì)胞涂片經(jīng)吉姆薩染色后，各類細(xì)胞由于其成份的差異而呈現(xiàn)出不同的著色，從而達(dá)到分辨各類細(xì)胞的目的。本項(xiàng)目為改良吉姆薩染色，適用于血涂片，肺泡灌洗液細(xì)胞滴片，骨髓細(xì)胞涂片，石蠟切片和冰凍切片的染色，染色目的多為觀察各類炎性細(xì)胞的特征及數(shù)量分布。

實(shí)驗(yàn)流程：

涂片/組織切片-改良吉姆薩染色-脫水封片-顯微鏡鏡檢

結(jié)果判讀：

樣本準(zhǔn)備方法及送樣運(yùn)輸要求（為保證染色成功率，血液、肺泡灌洗液、骨髓樣本建議客戶按以下方法自行涂片固定后送樣）：

1.涂片的制作方法：

1.1 血涂片制備：

（1）取新鮮血液（若用抗凝管收集的血液，放置最好不要超過(guò)24h，否則血液中白細(xì)胞的數(shù)量以及種類會(huì)明顯減少),選用干凈的粘附玻片，用移液槍吸取10ul的血液，滴加在玻片的一側(cè)(一般都是磨砂對(duì)側(cè))。

（2）再取一片輔助玻片（也可選用蓋玻片，依據(jù)個(gè)人手的力道習(xí)慣選擇），以45°角將其寬邊靠近血液，血液沿著接觸邊緣向兩邊暈開，當(dāng)兩邊都到達(dá)邊緣時(shí)，輕輕地穩(wěn)健且勻速地推向磨砂面一側(cè)，進(jìn)行涂片，然后快速果斷地拿走載玻片。可見涂片首尾分明，厚薄均勻。（一般情況下，涂抹速度力道適中的話，取走玻片時(shí)載玻片上的血幾乎無(wú)殘留，且涂抹出的血涂片無(wú)明顯細(xì)胞破碎，變形。在顯微鏡下可觀察到細(xì)胞呈單個(gè)緊密排列，整體比較均勻。）

（3）自然晾干后，用甲醇浸泡固定15min，自然晾干后4℃保存運(yùn)輸。

1.2 肺泡灌洗液和骨髓涂片制備：

（1）取細(xì)胞懸液，2800r 4℃離心5min去上清。若沉淀紅色較多，則需要用紅細(xì)胞裂解液（G2015）裂解紅細(xì)胞。細(xì)胞沉淀加入紅細(xì)胞裂解液200ul，渦旋混勻，放在冰上裂解2min后加入1ml PBS終止裂解。2800r 4℃離心5min去上清后加PBS重懸。若沉淀紅色不多，則不需要裂解紅細(xì)胞，直接棄上清液，加PBS重懸。根據(jù)細(xì)胞沉淀量對(duì)應(yīng)加入PBS：

①若肉眼觀察無(wú)明顯細(xì)胞沉淀，直接加入50ul PBS，用移液槍吹打混勻后，涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的小圓圈中（3cm×2cm的橢圓)；

②若細(xì)胞沉淀量為綠豆大小，加入200ul PBS，用移液槍吹打混勻后，吸取50ul，涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的小圓圈中（3cm×2cm的橢圓)；

③若細(xì)胞沉淀量很多，黃豆大小或更大，加入1ml PBS,用移液槍吹打混勻后，吸取150ul，涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的大圓圈中（最大長(zhǎng)邊約5cm，最大短邊約2cm的橢圓）。在顯微鏡下觀察細(xì)胞量的多少，若還是過(guò)厚，再用PBS對(duì)倍稀釋該細(xì)胞懸液，直至在顯微鏡下觀察到細(xì)胞量涂布均勻。

（2）用移液槍將細(xì)胞懸液鋪滿整個(gè)圓圈，涂片放置自然晾干（因細(xì)胞未經(jīng)固定，不可通過(guò)烘箱加快晾干）。

（3）將晾干后的涂片放入丙酮中浸泡固定1min，自然風(fēng)干，4℃保存運(yùn)輸。

2. 石蠟切片常溫運(yùn)輸，冰凍切片-20℃運(yùn)輸。