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      彗星實驗,單細胞凝膠電泳實驗檢測服務

      彗星實驗(Comet Assay),也稱為單細胞凝膠電泳實驗(Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE),是一種用于檢測細胞DNA損傷的分子生物學技術。該實驗因其在顯微鏡下觀察到的DNA遷移圖案形似彗星而得名。彗星實驗廣泛應用于毒理學、環境科學、放射生物學和癌癥研究等領域,用于評估化學物質、輻射或其他因素對DNA的損傷。

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      • 更新時間:2025-02-14
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      信帆生物提供:彗星實驗,單細胞凝膠電泳實驗檢測服務

      服務介紹:彗星實驗(Comet Assay),也稱為單細胞凝膠電泳實驗(Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE),是一種用于檢測細胞DNA損傷的分子生物學技術。該實驗因其在顯微鏡下觀察到的DNA遷移圖案形似彗星而得名。彗星實驗廣泛應用于毒理學、環境科學、放射生物學和癌癥研究等領域,用于評估化學物質、輻射或其他因素DNA的損傷。
      檢測原理:
      當細胞受到外部因素(如輻射、重金屬暴露、化學物質等)影響時,細胞內的DNA可能出現單鏈或雙鏈斷裂。在中性或堿性條件下,細胞經過裂解、解旋和電泳等步驟后,損傷的DNA斷鏈及片段會離開核DNA向陽極移動,形成彗星狀的圖像。DNA受損越嚴重,產生的斷片越多且片段越小,電泳時遷移的DNA量也就越大,遷移距離越長。在熒光顯微鏡下,可以觀察到尾長增加、尾部熒光強度增強。在一定條件下,DNA遷移距離(彗星尾長)和DNA含量(熒光強度)分布與DNA損傷程度呈線性相關。
      實驗步驟:
      1
      、單細胞懸液制備:將細胞調整為適當的濃度,用于后續的制膠步驟。
      2
      、制膠:在載玻片上制備三層膠,第一層為正常熔點瓊脂糖,用于使第二層平整和附著緊密;第二層為含有細胞的低熔點瓊脂糖,用于固定細胞;第三層為低熔點瓊脂糖,對第二層細胞起保護作用。
      3
      、細胞裂解:將載玻片浸入細胞裂解液中,溶解細胞膜及核膜,除去蛋白質、RNA等,僅存留核骨架。
      4
      DNA堿解旋:將載玻片置于堿性電泳緩沖液中,使DNA在堿性條件下解螺旋形成單鏈DNA,并使DNA斷鏈在電泳場中易于遷移。
      5
      、單細胞電泳:在適當的電壓和電流條件下進行電泳,使損傷的DNA斷鏈及片段向陽極移動。
      6
      、中和與染色:電泳完畢后,用中和液處理載玻片,然后用熒光染料(如溴化乙錠)對DNA進行染色。
      7
      、鏡檢和圖像分析:在熒光顯微鏡下觀察并拍照電泳圖譜,利用圖像分析軟件對彗星圖像進行指標分析,如彗星全長、尾長、尾矩和Olive尾距等。
      注意事項:
      1
      、細胞活性:確保細胞在處理過程中保持活性,避免人為損傷。
      2
      、實驗條件:嚴格控制電泳時間、電壓和緩沖液pH,以確保結果的可重復性。
      3
      、數據分析:使用標準化軟件分析彗星圖像,避免主觀誤差。
      4
      、對照設置:設置陽性和陰性對照,確保實驗結果的可靠性。


      彗星實驗,單細胞凝膠電泳實驗檢測服務
      僅供科研實驗用,不做其他用途!

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