細胞樣本中甘油含量檢測試劑盒

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 細胞樣本中甘油含量檢測試劑盒

適用范圍：測定實體組織、細胞中的甘油濃度。組成 (105 次微板測定或 30 次 1 ml 比色杯測定)：

(1) 裂解液 50 ml 

(2) R1 試劑 16 ml

(3) R2 試劑 4 ml 

(4) 4 mmol/L 甘油標準品 1 ml

4 oC，儲存 3 月。

所需設備：酶標儀、生化分析儀或 721、722 型可

見光分光光度計。佳工作波長 550nm，如無此波

長建議優先選用 570nm、次選 530、490nm。

一 組織細胞裂解 

細胞(包括分化的脂肪細胞)裂解： 消化、離心收集細胞?；蛑苯釉谂囵B皿內裂解。通常6孔板單孔約2x106個細胞，75cm2瓶約1x107細胞。按比例每 1~2 x 106細胞加 0.1ml 裂解液，混勻，靜置 10 分鐘。

動物組織裂解：

切記要預先將新鮮組織切稱重后再進行保存。組織凍存后再進行解凍、剪切、稱重可能會產生嚴重的測量誤差。離心管精確稱重，加入組織塊后再稱重，二者相減(即減量稱重法)計算組織量(約 100mg)。強烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質含量變異而產生的誤差。（注意；裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質提取）。用電動高速勻漿器或手動玻璃勻漿器破碎組織。（不推薦超聲方法，因其不能*和均勻破碎。應根據預實驗調整初始的組織細胞加入量），而后，靜置 10 分鐘。

二. 裂解液處理： 

1. 取適量上清液轉移到 1.5ml 離心管中，進行步驟

2 的操作。余下的裂解液可用 BCA 法蛋白定量試劑盒進行蛋白定量或－20oC 儲存。

2. 70oC 加熱 10 分鐘滅活脂肪酶，可能出現絮狀沉淀。

3. 室溫 5000rpm 離心 5 分鐘，上層清液即可用于酶學測定。

三 工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與1 ml 試劑 R2 混合即可，立即使用或 4oC 保存<1 天，變色棄去。（注意：謹防來源不明但容易發生的甘油污染，可來自操作者本人或標準品液體微粒濺射等。）

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