鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF

鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF

英文名稱：Streptavidin Berpharose FF

貨號(hào)：B2384

1.產(chǎn)品介紹

鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF（Streptavidin Berpharose FF）是一種將鏈霉親和素（Streptavidin）鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的親和層析分離介質(zhì)，利用生物-素與鏈霉親和素配體之間的相互作用分離純化生物-素或生物-素化的抗原、抗體、核酸等物質(zhì)。

鏈霉親和素與生物之間的親和力很強(qiáng)，需要在變性條件下洗脫，這個(gè)特性可用于抗原與抗體的分離，如將生物-素化的抗體結(jié)合在凝膠上，然后利用抗原抗體的親和特性純化無生物-素化的抗原，抗原洗脫時(shí)抗體不會(huì)被洗脫。鏈霉親和素對(duì)亞氨基生物-素的親和力相對(duì)較弱，可以在pH9.5-11.0結(jié)合，pH4.0時(shí)洗脫，不需要使用變性劑所以能更好的保持親和素偶聯(lián)物的活性。                   

2.規(guī)格：1ml（預(yù)裝柱）、5ml（預(yù)裝柱）、10ml（預(yù)裝柱）、20ml、100ml、500ml

儲(chǔ)存溫度：4-8℃

3.純化流程

①緩沖液:

（1）純化生物-素或生物-素化物質(zhì)

結(jié)合緩沖液：20mM NaH2PO4, 150mM NaCl，pH7.4

洗脫緩沖液：8M鹽酸胍，pH1.5

（2）純化2-亞氨基生物-素或2-亞氨基生物-素標(biāo)記的物質(zhì)

結(jié)合緩沖液：50mM碳酸銨，500mM NaCl，pH10.0

洗脫緩沖液：50mM乙酸銨，500mM NaCl，pH4.0

（3）純化抗原或抗體

結(jié)合緩沖液：20mM NaH2PO4，150mM NaCl，pH7.4

洗脫緩沖液：100mM甘氨-酸-鹽酸，pH3.0

注：

用于生物-素化的抗體純化未生物-素化的抗原（或生物-素化的抗原純化未生物-素化的抗體）有2種方法，①可先在游離狀態(tài)下抗原與抗體結(jié)合，然后當(dāng)樣品純化即可；②也可以將生物-素化的抗體（或抗原）先結(jié)合柱上，然后對(duì)應(yīng)的未生物-素化的抗原（或抗體）當(dāng)樣品純化。

②樣品準(zhǔn)備

上柱的樣品應(yīng)盡量保持與結(jié)合緩沖液一致。通常可用透析、超濾、稀釋等方法處理樣品。并且上柱前應(yīng)過0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物。

③樣品純化

（1）取適量的鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中，用結(jié)合緩沖液平衡5個(gè)柱體積，建議流速為100cm/h。

（2）將準(zhǔn)備好的樣品緩慢上柱，為保證樣品與鏈霉親和素充分結(jié)合，應(yīng)控制好上樣流速，建議流速為15-50cm/h。

（3）上樣后用結(jié)合緩沖液平衡10個(gè)柱體積以上，或平衡至基線，洗去雜質(zhì)，推薦流速為100cm/h。

（4）用洗脫緩沖液洗10-20個(gè)柱體積，建議流速為100cm/h，收集的洗脫液應(yīng)立即調(diào)節(jié)pH至穩(wěn)定范圍，并根據(jù)需要置換緩沖液。

（5）洗脫目的蛋白后的柱子應(yīng)立即用中性的結(jié)合緩沖液平衡，并用20%乙醇保存柱子，或進(jìn)行下一次純化。

6.注意事項(xiàng)：

1)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果。

2)去除一些沉淀或變性物質(zhì)，建議使用下面的方法用2倍柱體積的0.1M NaOH或6M鹽酸胍或8M尿素溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH7.4清洗。去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)3-4倍柱體積70%乙醇或2倍柱體積的1% TritonX-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4清洗。

3)本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇，4~8℃。

4) 2-25℃,常壓,避光運(yùn)輸。

5)僅供科研實(shí)驗(yàn)使用。